淋巴细胞转化试验有形态计数法、MTT 法和同位素法三种。MTT 法即四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法。MTT 是一种噻唑盐,化学名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液为黄橙色。小鼠脾细胞受到ConA 作用后发生增殖活化,其胞内线粒体琥珀酸脱氢酶活性相应升高,MTT 作为其底物参与反应,形成蓝色的甲臜(Formazan)颗粒沉积于细胞内或细胞周围,经盐酸─异丙醇溶解后为蓝色溶液,可用酶标测定仪测定细胞培养物的OD 值,测定波长570nm。根据OD 值的大小计算反应体系中细胞增殖程度。
淋巴细胞转化试验寻找迟发型反应的原因:在上常由于服用某种药物而发生迟发型反应疾病,为了寻找病因,可将患者外周血淋巴细胞与可疑药物共同培养,若转化率**对照药物,即可判明病因。
淋巴细胞转化试验估计疾病的和预后:恶性或慢性白色病,经转移因子或*增强剂后,其转化率可由前的低值转变为正常,反之则预后不良。
淋巴细胞转化试验意义:
T淋巴细胞受特抗原或非特等后,发生母细胞转化,DNA合成增加。可由此了解T细胞的应答功能,这反映出受试者T细胞总体水平的应答功能,判断细胞*状态和探讨发病机制:
(l)转化率增高:只有Down综合征患者外周血淋巴细胞对PHA较正常人敏感,微量PHA即可使本病患者T细胞发生转化。
(2)转化率降低:细胞*缺陷或功能低下者,其转化率可明显低于正常,如运动失调性毛细血管扩张症,本病由于胸腺发育不良,细胞*能力低下,OT反应阴性。
此外,如各种恶性、霍奇金病、、淋巴肉芽肿等疾病时均可低于正常值。
淋巴细胞转化试验影响因素:
1.本试验需进行细胞培养,因此静脉采血时要特别注意无菌操作,需用无菌肝素抗凝管放置血标本。
2.采血后应立即分离淋巴细胞进行试验。只宜暂时在室温放置,而不可4℃存放。
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